脂质体转染方法

任正新 主治医师 河西学院附属张掖人民医院 三甲

擅长：擅长糖尿病、心血管系统疾病和临床常见病、多发病的诊断和治疗。对体检综合分析和健康指导有一定的经验。

提问

脂质体转染、微泡介导转染、电穿孔法、基因枪法以及慢病毒载体转染等是常用的脂质体转染方法。如果在使用过程中出现任何不适或症状持续不改善，应立即寻求专业医疗帮助。
1.脂质体转染
脂质体转染通过将DNA包裹在脂质体小球内，利用其带负电荷与细胞膜上的阳离子受体结合，实现跨膜转运。通常在无血清条件下孵育细胞后执行。此方法利用了细胞膜的特性，在特定条件下促进外源DNA进入细胞核，从而实现基因表达调控。对于许多类型的细胞培养系统是有效的选择。
2.微泡介导转染
微泡介导转染涉及使用微泡结构将药物或基因组材料递送到目标细胞。微泡由气体和表面活性剂组成，在声波作用下形成，然后与目标细胞接触释放内容物。这种技术利用了气泡-生物界面的物理性质来促进物质传递。它适用于多种类型细胞，并且具有较高的效率和较低的细胞毒性。
3.电穿孔法
电穿孔法通过短暂而强烈的脉冲电流产生暂时性细胞膜漏洞，使核酸能够进入细胞内部。操作过程中需要设计合适的脉冲参数以优化效果。该技术利用了电场作用下的暂时性膜漏洞，促进了核酸分子向细胞内的运输。对于某些难于转染的细胞类型如原代细胞有效。
4.基因枪法
基因枪法是一种高速弹丸发射系统，用于将DNA颗粒射入细胞，诱导细胞吸收外源DNA。该过程需配制含有目的基因的DNA颗粒，并调整发射参数以提高效率。基因枪法利用高速粒子撞击细胞引发机械损伤，促进外源DNA进入细胞。对于特定类型的细胞培养系统有较好效果。
5.慢病毒载体转染
慢病毒载体转染通过构建含目的基因的慢病毒载体，感染目标细胞以实现稳定表达。整个过程包括病毒包装、感染细胞并筛选稳定转染株。慢病毒载体因其能潜伏感染宿主细胞并长期表达外源基因而被广泛应用。该方法适合于稳定表达及难以转染的目标细胞。
在应用脂质体转染时，应遵守正确的操作规程以减少细胞死亡的风险。同时注意可能出现的意外副作用，如可能导致局部组织发红、肿胀等。

陈茵沫 主治医师 三甲

提问

转染是把外源的分子导入细胞中，转染的是较大的不能自由穿过细胞膜的分子，葡萄糖用转染么？不用的对吧。转染分子到细胞中，是玩么？不是，那就是说转染是有目的的，是实验设计的结果，有显微注射技术，你想给细胞转染什么都可以，但要知道你的目的。回到你的问题，转染可以转染任何分子。DNA转染细胞可以不构建质粒，要看你的实验设计，电转是靠电压在细胞上打孔，再靠电压把转染的分子推进去，和是不是质粒没有关系，构建在质粒上是要靠质粒去表达，不需要靠质粒表达的就不用，但大多数都是以表达为目的的，我们做的极少数时间就不需要构建到质粒上，RNA就不用说了，它是不需要构建到质粒上的，RNA多转的是小RNA，micRNA、snRNA啊什么的，这些我做的不多，染色体、染色体组就要用显微注射，一些太大的质粒也可以用显微注射，不然用电转啊，脂质体啊效率几乎为零，无法开展实验。